學(xué)會(huì)這些問(wèn)題，攻克ELISA試驗(yàn)垂手可得?。。?/h1>

發(fā)布時(shí)間： 2020-04-21　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1590次

Q1.標(biāo)曲不顯色或顯色很弱，樣本顯色

溶解標(biāo)準(zhǔn)品以及倍比稀釋時(shí)，未渦旋震動(dòng)或不夠充沛。標(biāo)準(zhǔn)品溶解、倍比稀釋時(shí)均需要渦旋震動(dòng)以確保充沛混勻。單純依托移液器重復(fù)吹打，效率較低、作用也不一定jia。

Q2.標(biāo)曲和樣本均不顯色

在孵育階段靜置在桌面上，這樣非常不利于抗原抗體之間的充沛接觸，導(dǎo)致顯色偏弱。引薦孵育階段，運(yùn)用ELISA的微孔板振蕩器，調(diào)至適宜的頻率，使抗原抗體充沛接觸，確保結(jié)合作用。

Q3.標(biāo)曲顯色，樣本不顯色

當(dāng)樣本中意圖蛋白濃度極低或許樣本中干擾因素較強(qiáng)，就無(wú)法檢測(cè)到?，F(xiàn)在ELISA仍然是蛋白檢測(cè)靈敏度gao的方法，與不同技術(shù)結(jié)合后，衍生出了多種類型的ELISA，提高了檢測(cè)靈敏度。

Q4.標(biāo)曲和樣本都顯色，但復(fù)孔的CV大

這個(gè)問(wèn)題就跟移液器和試驗(yàn)者的操作有關(guān)了。移液器的運(yùn)用保護(hù)不標(biāo)準(zhǔn)，就會(huì)形成移液的差錯(cuò)較大；試驗(yàn)者自身的操作習(xí)氣、加樣的一致性對(duì)復(fù)孔的CV也有很大影響。把握移液器的正確運(yùn)用和保護(hù)。關(guān)于個(gè)人的操作可操練移液動(dòng)作、加快速度，確保移液的精密度。

Q5.本底偏高，樣本值測(cè)不到

標(biāo)曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(對(duì)于高敏ELISA可以適當(dāng)放寬要求)。尤其是樣本值特別低的時(shí)分，本底過(guò)高會(huì)掩蓋意圖信號(hào)，導(dǎo)致無(wú)法測(cè)到樣本值。
在參加TMB顯色后，需實(shí)時(shí)調(diào)查標(biāo)曲顯se狀況。通常在S5孔有肉眼可見(jiàn)的微弱藍(lán)色，即可停止反應(yīng)。

Q6.樣本經(jīng)不同梯度稀釋，核算得到的樣本值差異較大

有時(shí)分我們不清楚樣本中意圖蛋白的濃度怎么，應(yīng)該怎么稀釋，那么我們就會(huì)做下預(yù)試驗(yàn)，確認(rèn)稀釋倍數(shù)。然而有時(shí)分同一樣本做了幾個(gè)不同梯度稀釋后，核算得到的樣本值之間差異較大，應(yīng)該選擇哪一個(gè)稀釋倍數(shù)呢？

Q7.不同試劑盒中的組分能否通用

除非是公用的試劑如洗液、檢測(cè)緩沖液，其它組分不主張用其它試劑盒的組分，乃至是同一指標(biāo)不同批次的試劑盒里的組分。這些組分(包含標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、檢測(cè)抗體、酶等)都是經(jīng)過(guò)優(yōu)化的，假如貿(mào)然運(yùn)用其它試劑盒的組分，有可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。

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